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反相纯化寡核苷酸案例分享
01
背景介绍
核酸药物是继小分子药物、抗体药物之后的第三代创新药物,目前全球已有13款核酸药物获批上市。寡核甘酸作为主流的核酸药物,其合成方法包括固相合成和液相合成。其中,固相亚磷酰胺法作为现在常用的合成方法,合成过程中固相载体的性能、反应效率、原料的质量、副反应等都会影响合成的寡核苷酸的质量,主要表现为单个或多个不同于产品的序列的差异,即“N-X”杂质和“N+”杂质,根据杂质分子和目标产品性质间的差异,可通过反相层析(RPC)、疏水层析(HIC)、离子交换层析(IEC)等方法进行分离纯化。
![](http://n.sinaimg.cn/spider20230612/792/w623h169/20230612/54b2-b88e5e8b4e835c58d5b8f3c42167ddbe.png)
寡核苷酸纯化策略
02
案例分析
寡核苷酸的反相层析(RPC)相对于离子交换层析(IEC)可以收获更高纯度的样品,但载量低且需使用大量有机溶剂,成本较高,离子交换层析(IEC)载量高,更加环保,成本也较低,当反相层析(RPC)和离子交换层析(IEC)无法完全去除目标产物中的杂质时可以尝试用疏水层析(HIC)的模式进行分离纯化,下面主要分享离子对反相层析在寡核苷酸分离中的应用实例。
实
验
条
件
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实
验
图
谱
![](http://n.sinaimg.cn/spider20230612/610/w955h455/20230612/4cb1-cd42376b79517e42a9dc909ad1d46e96.png)
(A): UniSil 10-120 C18 纯化寡核苷酸制备图谱
![](http://n.sinaimg.cn/spider20230612/610/w955h455/20230612/ea20-acfda13e2d7186024c61e70cdd44628c.png)
(B): UniSil 10-120 C18 Aq 纯化寡核苷酸制备图谱
![](http://n.sinaimg.cn/spider20230612/610/w955h455/20230612/727c-c97c14a005c2375e371111455378b285.png)
(C): UniPS 10-300纯化寡核苷酸制备图谱
实
验
结
论
从制备图可以看出,UniSil 10-120 C18与UniSil 10-120 C18 Aq的出峰时间基本一致,UniPS 10-300相对于前两款填料疏水性更弱一些,出峰时间较早,峰更宽一些,三款填料在较高载量的情况下都能达到较高的纯度和收率。
![](http://n.sinaimg.cn/spider20230612/75/w744h131/20230612/3950-2b4ad4b351998e265013c9cdbc97e9b1.png)
三款填料纯化寡核苷酸工艺参数表
![](http://n.sinaimg.cn/spider20230612/163/w681h282/20230612/5782-f54f8ab5451f21f3cb7c17bb73bb0567.png)
UniPS 10-300纯化寡核苷酸粗品与馏分HPLC图谱对比
关于寡核苷酸分离与纯化的工艺还有很多,欢迎大家留言交流讨论。
03
订货信息
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![](http://n.sinaimg.cn/spider20230612/502/w1080h222/20230612/682d-d2dd977eb88796a1ab48d86356b49749.png)
关于纳微
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纳微科技 688690.SH
苏州纳微科技股份有限公司是一家专门从事高精度、高性能和高质量微球材料研发和生产的国家高新技术企业,是全球能提供多品种多规格微球产品的公司之一。
公司致力于建设全球领先的纳米微球精准制备和应用平台,产品涵盖硅胶正相、反相、HILIC、手性填料,聚合物反相、离子交换、疏水层析、亲和层析(Protein A、金属螯合、苯硼酸)、固相萃取、凝胶渗透色谱及特殊功能填料;提供色谱柱、磁珠、标准颗粒、分析检测、分离纯化实验技能培训及分离纯化整体解决方案。
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NanoMicro
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