转自：纳微科技
反相纯化寡核苷酸案例分享
01
背景介绍
核酸药物是继小分子药物、抗体药物之后的第三代创新药物，目前全球已有13款核酸药物获批上市。寡核甘酸作为主流的核酸药物，其合成方法包括固相合成和液相合成。其中，固相亚磷酰胺法作为现在常用的合成方法，合成过程中固相载体的性能、反应效率、原料的质量、副反应等都会影响合成的寡核苷酸的质量，主要表现为单个或多个不同于产品的序列的差异，即“N-X”杂质和“N+”杂质，根据杂质分子和目标产品性质间的差异，可通过反相层析(RPC)、疏水层析（HIC)、离子交换层析(IEC)等方法进行分离纯化。
寡核苷酸纯化策略
02
案例分析
寡核苷酸的反相层析(RPC)相对于离子交换层析（IEC)可以收获更高纯度的样品，但载量低且需使用大量有机溶剂，成本较高，离子交换层析（IEC)载量高，更加环保，成本也较低，当反相层析(RPC)和离子交换层析（IEC)无法完全去除目标产物中的杂质时可以尝试用疏水层析（HIC)的模式进行分离纯化，下面主要分享离子对反相层析在寡核苷酸分离中的应用实例。
实
验
条
件
实
验
图
谱
(A): UniSil 10-120 C18 纯化寡核苷酸制备图谱
(B): UniSil 10-120 C18 Aq 纯化寡核苷酸制备图谱
(C): UniPS 10-300纯化寡核苷酸制备图谱
实
验
结
论
从制备图可以看出，UniSil 10-120 C18与UniSil 10-120 C18 Aq的出峰时间基本一致，UniPS 10-300相对于前两款填料疏水性更弱一些，出峰时间较早，峰更宽一些，三款填料在较高载量的情况下都能达到较高的纯度和收率。
三款填料纯化寡核苷酸工艺参数表
UniPS 10-300纯化寡核苷酸粗品与馏分HPLC图谱对比
关于寡核苷酸分离与纯化的工艺还有很多，欢迎大家留言交流讨论。
03
订货信息
关于纳微
纳微科技 688690.SH
苏州纳微科技股份有限公司是一家专门从事高精度、高性能和高质量微球材料研发和生产的国家高新技术企业，是全球能提供多品种多规格微球产品的公司之一。
公司致力于建设全球领先的纳米微球精准制备和应用平台，产品涵盖硅胶正相、反相、HILIC、手性填料，聚合物反相、离子交换、疏水层析、亲和层析（Protein A、金属螯合、苯硼酸）、固相萃取、凝胶渗透色谱及特殊功能填料；提供色谱柱、磁珠、标准颗粒、分析检测、分离纯化实验技能培训及分离纯化整体解决方案。
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