案例分析|反相纯化寡核苷酸案例分享

案例分析|反相纯化寡核苷酸案例分享
2023年06月12日 10:00 市场资讯

转自:纳微科技

反相纯化寡核苷酸案例分享

01

背景介绍

核酸药物是继小分子药物、抗体药物之后的第三代创新药物,目前全球已有13款核酸药物获批上市。寡核甘酸作为主流的核酸药物,其合成方法包括固相合成和液相合成。其中,固相亚磷酰胺法作为现在常用的合成方法,合成过程中固相载体的性能、反应效率、原料的质量、副反应等都会影响合成的寡核苷酸的质量,主要表现为单个或多个不同于产品的序列的差异,即“N-X”杂质和“N+”杂质,根据杂质分子和目标产品性质间的差异,可通过反相层析(RPC)、疏水层析(HIC)、离子交换层析(IEC)等方法进行分离纯化。

寡核苷酸纯化策略

02

案例分析

寡核苷酸的反相层析(RPC)相对于离子交换层析(IEC)可以收获更高纯度的样品,但载量低且需使用大量有机溶剂,成本较高,离子交换层析(IEC)载量高,更加环保,成本也较低,当反相层析(RPC)和离子交换层析(IEC)无法完全去除目标产物中的杂质时可以尝试用疏水层析(HIC)的模式进行分离纯化,下面主要分享离子对反相层析在寡核苷酸分离中的应用实例。

(A): UniSil 10-120 C18 纯化寡核苷酸制备图谱

(B): UniSil 10-120 C18 Aq 纯化寡核苷酸制备图谱

(C): UniPS 10-300纯化寡核苷酸制备图谱

从制备图可以看出,UniSil 10-120 C18与UniSil 10-120 C18 Aq的出峰时间基本一致,UniPS 10-300相对于前两款填料疏水性更弱一些,出峰时间较早,峰更宽一些,三款填料在较高载量的情况下都能达到较高的纯度和收率。

三款填料纯化寡核苷酸工艺参数表

UniPS 10-300纯化寡核苷酸粗品与馏分HPLC图谱对比

关于寡核苷酸分离与纯化的工艺还有很多,欢迎大家留言交流讨论。

03

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苏州纳微科技股份有限公司是一家专门从事高精度、高性能和高质量微球材料研发和生产的国家高新技术企业,是全球能提供多品种多规格微球产品的公司之一。

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