干货 | 预约另一台qPCR仪器数据变异常？速查你的ROX选对了吗？

转自：诺唯赞生物

昨天做的qPCR实验数据还是正常的，今天预约了另一台仪器，得到的扩增曲线怎么是“十字型”？

在仪器设置中将参比染料由ROX更改为NONE，取消ROX的校正功能，若扩增曲线恢复正常，则判定是BadRox的问题；

BadRox是什么？有什么办法可以避免这种问题的出现吗？

当然啦，让我们一起来了解一下如何避免qPCR下机数据中出现BadRox的问题~

为什么更换仪器后会出现BadRox报错？

BadRox报错是因为更换qPCR仪器后，试剂中添加的ROX浓度与仪器不匹配导致的。

什么是ROX？

ROX是一种惰性参比荧光染料，能被qPCR仪检测到，但其荧光信号值在qPCR反应中基本保持不变，不会随着qPCR扩增而增强，不会对qPCR反应产生影响（如图1）。

图1. qPCR原始荧光图谱

为什么qPCR试剂中要添加ROX？

ROX具有校正数据误差的作用，提高数据精确性。主要用于纠正由于qPCR反应本身的物理因素而导致的荧光信号变化，帮助排除可疑数据。

如何避免出现BadRox报错?

不同qPCR仪器由于激发光学系统不同，其需要的ROX染料浓度也不同。目前市面上的qPCR仪器分为不需要ROX校正、需要高浓度ROX校正以及需要低浓度ROX校正的三种仪器，当我们在选择qPCR预混试剂时，要注意选择含有适配于当前机型ROX的qPCR试剂才能避免BadRox报错情况发生。常见的qPCR仪器与所需的ROX浓度参考如下表：

图2. qPCR仪器与参比染料对照卡

除了难以判断qPCR仪器及其适配的ROX浓度之外，更头疼的是预约到平台的不同的共享仪器时，还要更换含有不同浓度的ROX试剂，如果有一款定量产品通用于所有的qPCR仪器就好了！

Vazyme热卖qPCR试剂（ROX通用款）：Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix (Vazyme #Q712），其中含有特殊的 ROX Reference Dye，适用于各种主流PCR仪器，无需在不同qPCR仪器上调整ROX的浓度。

此外，本产品采用的Taq Pro DNA Polymerase是经过升级改造的、基于抗体法修饰的新一代热启动聚合酶，配以针对 qPCR 优化的合适Buffer以及特异性促进因子，有效避免引物二聚体和非特异性扩增的产生，同时扩增效率更加稳定，更适合于低表达体系的检测，且扩增荧光强度大幅度提高，轻松获得优美曲线。

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