《食品安全国家标准食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定》解读_新浪财经

转自：中国市场监管报

　　三氯蔗糖也称蔗糖素，是一种以蔗糖为原料加工而成的新型氯化衍生物，作为非营养性强力甜味剂，甜度是蔗糖的600~ 700倍。三氯蔗糖的使用会减少其余糖类的摄入，而后者是引发心脑血管疾病的风险因素甘油三酯的主要来源，这对降低心脑血管疾病的风险、控制体重及减少与肥胖相关的多种疾病起到积极作用。但也有研究表明，过量食用三氯蔗糖会导致人体肠道菌群失衡，降低药物疗效，如添加三氯蔗糖会使小鼠诱发肝脏炎症。中国营养学会建议科学合理食用三氯蔗糖，具体使用量控制在15.0 mg/（kg·d）以下为宜。为适应三氯蔗糖检测需求，国家发布了GB 5009.298-2023《食品安全国家标准食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定》。本次主要解读5009.298的适用范围、基本原理、操作注意事项等。

标准适用范围与基本原理

　　标准适用于食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定，适用基质相对于原标准增加。

　　样品中三氯蔗糖经甲醇水提取，除去蛋白、脂肪，经固相萃取小柱净化，蒸干复溶后供液相色谱检测；或经固相萃取小柱净化供高效液相色谱-质谱联用仪检测。

样品前处理

　　样品提取分为不同类型，分为液态酒类，含有固体物质酒类，醋、酱油、酱及酱制品、果冻、蜜饯、糖，其他样品等。液态酒可直接蒸干复溶测定；含有固体物质的酒需要蒸干后用水反复提取后待净化，醋、酱油等需要加入中性氧化铝粉末，在加水涡旋，加甲醇提取，重复提取后加正己烷除油，蒸发至1mL后用水复溶待净化；果冻等需要加水涡旋、甲醇提取，用乙酸锌和亚铁氰化钾沉淀蛋白，60℃水浴震摇，后续提取醋、酱油等；其他试样与蜜饯基本相同，只是不需要60℃水浴震摇。用质谱检测样品全部用水提取，不需要加入甲醇。

　　质谱法检测样品直接上固相萃取小柱净化，液相检测样品蒸发后样品用水复溶后上固相萃取小柱净化，小柱为N-乙烯基吡咯烷酮和二乙烯基苯亲水亲酯平衡型填料为基质的固相萃取小柱对非极性至中等极性的酸性、中性、碱性化合物均有较好的回收率。可耐受pH值为1~14，兼容大多数溶剂，吸附容量和载样量远高于C18键合硅胶，适合复杂基质的处理。小柱使用前需经甲醇、水依次活化，上样完成后，用1mL水淋洗，用3mL甲醇洗脱。用质谱检测器直接加水定容至10mL后检测。使用液相色谱根据检测器不同，蒸干甲醇后使用标准中复溶剂复溶。

操作注意事项

　　样品取样：方法适用于所有食品，种类繁多，因此取样应均匀和具有代表性，取样前将样品充分混匀。如蜜饯、糖果等，其样品含糖量高、黏稠、很难混匀，取样时一定要注意已经制好样品是否均匀，可通过样品样式作初步判断。冷冻样品需要溶解混匀后再称取。

　　样品提取：使用质谱法检测提取试剂都为水，液相法时还需要加甲醇提取。醋、酱油等需要加入中性氧化铝再提取，加入中性氧化铝是为了中和试样中可能存在的酸性物质，从而使pH值稳定在中性范围内，避免酸性物质的影响对试剂的反应造成干扰。此外，氧化铝还具有吸附试样中的杂质和离子的作用，使试样更纯净，从而提高测定的准确性和精度。后续提取中注意中性氧化铝结块与否，如结块在提取时需要震散，提高提取效率，后续还需要用正己烷除油，注意将正己烷取出完全，以防在蒸发时爆沸而使样品喷出；糖果、蜜饯、其他样品等需要先加水涡旋使样品分散，加甲醇后还需加入沉淀剂，沉淀蛋白等；糖果、蜜饯等因为本身含糖量高，加沉淀剂后不易分散，还要额外加热至60℃后再震摇，以保证后续提取充分，后续处理同酱油。需要加沉淀剂样品如果不加沉淀剂，提取液会十分浑浊，不利于后续过柱处理。在蒸干浓缩过程中，不需要蒸至全干，需要剩余1mL，防止因为全干后部分样品复溶困难，分三次复溶是为了复溶完全，减少损失。

　　过柱：固相萃取小柱作为批量生产的工业产品，不同厂家不同批次可能存在一定的差异，在使用前注意小柱验收，验收合格之后再使用。小柱使用前活化后让柱体保持湿润，上样后调整流出速度，使其保持在2~3秒1滴，过快不利于目标化合物保留。

　　蒸干、复溶、过膜：三氯蔗糖十分容易溶于水，后续根据不同检测器需求按标准操作即可。

仪器分析

　　示差法检测：示差折光检测器主要受温度、流速以及流动相的种类等因素影响，需要较长时间平衡仪器基线；使用示差检测室需要控制好环境温度、柱温箱温度，以保证检测器温度保持在设定温度；流动相使用前脱气处理，避免因为流动相含有气体出现基线波动。可以把废液瓶和溶剂瓶放在示差检测器与泵以上位置，使样品池略有压力，有助于优化检测器性能。

　　蒸发光散射检测器法检测（ELSD）：ELSD的通用检测方法消除了常见于传统HPLC检测方法中的难点，不同于紫外和荧光检测器，ELSD的响应不依赖于样品的光学特性，任何挥发性低于流动相的样品均能被检测，不受其官能团的影响。需要注意，蒸发光散射检测器的辅助载气提高了检测灵敏度，但必须保持检测池内的清洁，避免污染；此外高精度的雾化和蒸发温度控制，保证了高精度的检测，需要配置高压氮气或空气，且实验中产生废气有害，需要妥善处理。

　　质谱法检测：用质谱法时，基质效应是影响测量准确性的关键因素，经考察，按标准处理样品基质效应不明显，不需要其他操作来减小基质效应。部分质谱带有切换功能，可将前面部分极性流出物切换至废液，减小对质谱的污染。

检测判定注意事项

　　部分样品即使使用固相小柱净化后使用液相色谱检测，仍然可能出现因干扰而误判的情况，对于部分可疑检出样品，建议使用质谱复测避免误判。

　　食品添加剂使用标准GB 2760中对三氯蔗糖使用量有明确限值；在使用液相法、质谱法出具结果时，注意蒸馏酒与其他食品的检出限和定量限是不同的，注意样品分类。

风险提示

　　GB 5009.298-2023《食品安全国家标准食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定》的发布，其适用范围扩充为所有食品，今年国家监督抽检计划把以往风险筛查的样品列为监督抽检计划，样品基质更加复杂，如含有大豆蛋白类样品、茶叶等样品，在使用液相检测时十分容易出现干扰杂峰，为避免误判，可使用质谱法检测。在检测过程中也要注意过程控制，避免出现因基质复杂、化合物增加而出现漏检或者测得值偏低的情况。

□四川省食品检验研究院王翔温泉