必看！CRISPR工具包的高效DNA提取protocol

转自：优宁维抗体专家

哇塞

为了评估CRISPR系统的编辑效率，一般会在96孔板中培养细胞，用于基因分型验证，大量的DNA纯化工作即将到来......

小优经过调查，发现各位科研工作者们都在使用一种快速且高效的细胞DNA提取试剂，据说一个96孔板的DNA提取只要15min！

准备好了嘛？一起进入快速提取的新时代！

prepGEM  Universal DNA提取是低数量细胞的理想选择，仅需15min即可纯化得到细胞DNA。

01

样本制备

1. 悬浮细胞：将承载细胞的整个载体放在离心机中，200RCF离心5min，去除掉培养基等液体，将细胞重悬在prepGEM试剂中。

2. 贴壁细胞：如果细胞在培养瓶中，首选的方法（胰蛋白酶或细胞刮板）消化细胞，200RCF离心5分钟。或可以将prepGEM提取液直接添加到细胞中；去除掉培养基等液体，将细胞重悬在prepGEM试剂中。

*prepGEM试剂对EDTA和其他螯合剂敏感。如果细胞呈现在含有edta的溶液中（如用于分离贴壁细胞的胰蛋白酶-edta），应在200 RCF离心，提取前在1X BLUE buffer中洗涤。

02

DNA提取流程

1. prepGEM适用于广泛的细胞数量，5-10w个细胞产量具有线性化，针对不同的细胞数量，添加的试剂盒终体积均有不同，请按照下表的细胞数量添加对应buffer。

2. 涡旋后放入PCR仪或其他加热模块中加热。

3. 样本完成以上程序即可进行下游使用。

4. 如需要保存，将DNA保存在-20℃。

03

PrepGEM试剂的流程看起来很简单，

除此之外还有什么优势呢？

●15min完成DNA纯化

● 无抑制剂的试剂意味着没有苛刻的化学清洗或多个步骤

● 单管提取可以保证样本的完整性

● 简化的工作流程节省了准备时间，降低了实验室成本，并显著减少了危险废物和塑料废物对环境的影响

Reference

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3. Zhang Y, Schmid B, Nielse TT, Neilse JE, Clausen C, Hyttel P, Holst B, Freude KK (2016) Generation of a human-induced pluripotent stem cell line

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5:5507, https://doi.org/10.1038/ncomms6507.

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